大鼠肝脏缺血再灌注时肝细胞凋亡与肿瘤坏死因子-α的关系

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-0793.2008.01.006

目的

探讨大鼠肝脏缺血再灌注时肝细胞凋亡与肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的关系。

方法

建立大鼠局部肝脏缺血再灌注模型，将72只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组和缺血再灌注组，采用放射免疫法测定再灌注后不同时相中血清TNF-α含量，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）和透射电镜观察肝细胞凋亡状态。

结果

再灌注后1、3、6 h和24 h血清TNF-α含量及肝细胞凋亡指数（HAI）明显高于正常组和假手术组，且均于6 h达到高峰，再灌注后各时相TNF-α水平与HAI呈显著正相关。

结论

肝脏缺血再灌注损伤过程中，TNF-α表达水平异常上调并可能对肝实质细胞凋亡起介导作用。

关键词: 肝脏, 缺血再灌注损伤, 肿瘤坏死因子-α, 凋亡

Objective

To investigate the relationship between hepatocellular apoptosis and tumor necrosis factor-alpha(TNF-α)in rats during hepatic ischemia-reperfusion.

Methods

With a rat model of acute hepatic ischemia-reperfusion,72 healthy male Wistar rats were randomly divided into 3 groups:normal group, sham-operated group and ischemia-reperfusion group. The concentrations of serum TNF-α was measured by radioimmunity technique and the hepatocellular apoptosis was detected by TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling(TUNEL) and electron microscope.

Results

The concentrations of serum TNF-α and hepatocellular apoptotic index(HAI)in ischemia-reperfusion group were higher than that in normal and sham-operated groups.Both TNF-α and HAI reached peak at 6 hour after reperfusion. There was a positive correlation between TNF-α and HAI.

Conclusion

There is an extraordinary up-regulation of the expression of TNF-α after hepatic ischemia-reperfusion and perhaps TNF-α is an inducible factor of hepatocellular apoptosis.

Key words: Liver, Ischemia-reperfusion injury, TNF-α, Apoptosis

图1 肝组织TUNEL 染色（×200）注：A 为假手术组，B 为IR 组；再灌注后，TUNEL 染色阳性的凋亡细胞（胞核棕黄着色，主要位于中央静脉周围）显著增多。

表1 肝脏缺血再灌注后不同时相血清TNF-α含量变化（μg/L，±s，n=8）

组别	1 h	3 h	6 h	24 h
N	0.58±0.11
S	0.61±0.10	0.69±0.14	0.67±0.12	0.70±0.17
IR	1.17±0.64*^#	1.37±0.72*^#	2.06±0.76*^#	1.51±0.69*^#

表1 肝脏缺血再灌注后不同时相血清TNF-α含量变化（μg/L，±s，n=8）

组别	1 h	3 h	6 h	24 h
N	0.58±0.11
S	0.61±0.10	0.69±0.14	0.67±0.12	0.70±0.17
IR	1.17±0.64*^#	1.37±0.72*^#	2.06±0.76*^#	1.51±0.69*^#

表2 肝脏缺血再灌注后不同时相HAI变化（%，±s，n=8）

组别	1 h	3 h	6 h	24 h
N	3.14±0.83
S	3.51±0.95	3.36±0.76	3.69±0.72	3.90±0.93
IR	27.69±3.16*#	31.69±3.44*#	47.80±3.47*#	35.95±3.11*#

表2 肝脏缺血再灌注后不同时相HAI变化（%，±s，n=8）

组别	1 h	3 h	6 h	24 h
N	3.14±0.83
S	3.51±0.95	3.36±0.76	3.69±0.72	3.90±0.93
IR	27.69±3.16*#	31.69±3.44*#	47.80±3.47*#	35.95±3.11*#

图2 肝细胞凋亡的超微结构改变（×15 000）注：胞核内可见染色质浓集、边聚

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Relationship between hepatocellular apoptosis and tumor necrosis factor-alpha in rats during hepatic ischemia-reperfusion.

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