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中华普通外科学文献(电子版) ›› 2011, Vol. 05 ›› Issue (02) : 104 -108. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-0793.2011.02.005

所属专题: 文献

论著

靶向CTNNB1的shRNA抑制结肠癌SW480细胞增殖的研究
黄文生1, 王天宝1(), 伍虹2, 钟诗龙3,(), 谭敏1   
  1. 1. 510080 广州,中山大学附属第一医院外科
    2. 中山大学孙逸仙纪念医院口腔科
    3. 广东省人民医院医学研究中心
  • 收稿日期:2010-05-03 出版日期:2011-04-01
  • 通信作者: 王天宝, 钟诗龙
  • 基金资助:
    广东省科技厅科研基金资助项目(2010B080701038)

ShRNA targeting against CTNNB1 inhibits growth of human colon cancer SW480 cells

Wen-sheng HUANG1, Tian-bao WANG1,(), Hong WU2, Min TAN3()   

  1. 1. Surgery Department, the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, China
  • Received:2010-05-03 Published:2011-04-01
  • Corresponding author: Tian-bao WANG, Min TAN
  • About author:
    Corresponding author: WANG Tian-bao, Email:
引用本文:

黄文生, 王天宝, 伍虹, 钟诗龙, 谭敏. 靶向CTNNB1的shRNA抑制结肠癌SW480细胞增殖的研究[J/OL]. 中华普通外科学文献(电子版), 2011, 05(02): 104-108.

Wen-sheng HUANG, Tian-bao WANG, Hong WU, Min TAN. ShRNA targeting against CTNNB1 inhibits growth of human colon cancer SW480 cells[J/OL]. Chinese Archives of General Surgery(Electronic Edition), 2011, 05(02): 104-108.

目的

探讨靶向CTNNB1的shRNA对人结肠癌SW480细胞的基因下调效应和细胞增殖的抑制作用。

方法

构建靶向CTNNB1的shRNA载体质粒,然后转染入结肠癌SW480细胞。用RT-PCR和Western blotting方法检测CTNNB1的mRNA和蛋白的表达情况。MTT实验评价转染后各组细胞的增殖情况,并用流式细胞仪检测各组细胞的周期分布和凋亡情况。

结果

靶向CTNNB1的shRNA能够明显下调CTNNB1 mRNA和蛋白质表达(P<0.05),其抑制率分别是43.87%和45.16%。MTT实验提示CTN组细胞在转染后呈现随着时间延长而进行性增殖抑制的现象。在转染后72 h,CTN组的细胞存活率为46.4%,与空白对照组相比有显著性降低(P<0.05)。而流式细胞仪显示CTN组细胞有明显G0/G1周期阻滞和凋亡率增高(P<0.05)。

结论

靶向CTNNB1的特异性shRNA对结肠癌SW480细胞具有下调CTNNB1基因表达,促进细胞凋亡并且显著抑制细胞增殖的效应。

Objective

To observe the inhibitory effect of CTNNB1 gene expression and cell proliferation of the human colon cancer cell line SW480 caused by CTNNB1-targeted ShRNA.

Methods

The shRNA against CTNNB1 was constructed and transfected into SW480 cells. The down-regulations of CTNNB1 expressions were detected by RT-PCR and Western blotting analysis. The cell proliferation was determined by soft agar colony formation assay. The effect of these shRNAs on cell cycle distribution and apoptosis was examined by flow cytometry.

Results

The CTNNB1-shRNA efficiently suppressed the expression of CTNNB1 mRNA and protein, P<0.05. The expression inhibition rates were 43.87% and 45.16% at the mRNA and protein level respectively. The MTT assay indicated that the specific shRNA resulted in significant inhibition of cell growth on the culture plates on a time-dependent manner. Seventy-two hours after transfection, the cell viability of CTN group was 46.4%, which was of statistical significance when compared with that of blank control group, P<0.05. Moreover, the cancer cells showed significant G0/G1 arrest and increased apoptosis in the CTN group by flow cytometry, P<0.05.

Conclusion

The specific CTNNB1-shRNA may down-regulate the expression of CTNNB1 gene, increase apoptosis and inhibit the growth of SW480 cells.

图1 特异性RNA干扰介导的CTNNB1 mRNA表达下调
图2 特异性RNA干扰介导的CTNNB1蛋白表达下调
表1 转染后不同时间点的各组SW480细胞的存活率(%)
表2 shRNA干扰对各组细胞的周期分布与凋亡的影响结果(%)
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