Hedgehog信号通路转录因子Gli2在肝癌组织中的表达及意义

doi:10.3877/cma.j.issn.1647-0793.2013.01.004

目的

探讨Hedgehog（Hh）信号通路下游转录因子胶质瘤相关癌基因同源蛋白2（Gli2）在肝细胞癌组织中的表达及临床意义。

方法

采用Real time RT-PCR法及Western blot检测20对肝癌及癌旁组织Gli2基因mRNA及蛋白的表达；采用免疫组织化学法检测52对肝癌及癌旁组织Gli2蛋白的表达情况。

结果

Gli2 mRNA及蛋白在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织。52例肝癌组织中Gli2阳性表达38例（73.1%），相应的癌旁组织Gli2阳性表达8例（15.4%），差异有显著性（P<0.01）；且Gli2蛋白表达与肝癌分化程度、有无血管侵犯及淋巴结转移有相关性（P<0.05）。

结论

Gli2的异常表达与肝癌的发生发展及浸润转移密切相关，Gli2可能成为肝癌的重要生物学标志和生物治疗靶点。

关键词: 肝癌, Hedgehog信号通路, Gli2, 转录因子

Objective

To investigate the expression and clinical significance of downstream transcription factor glioma-associated oncogene homologue 2(Gli2) of Hedgehog(Hh) signaling pathway in human hepatocellular carcinoma(HCC).

Methods

Real time RT-PCR and Western blot were used for detection of mRNA and protein of Gli2 in 20 pairs of HCC tissues and corresponding paraneoplastic liver tissues; Immunohistochemistry was used for detection of Gli2 protein in 52 pairs of HCC tissues and paraneoplastic liver tissues.

Results

mRNA and protein expression of Gli2 in HCC were significantly higher than in paraneoplastic liver tissues. Immunohistochemical results showed that positive expression of Gli2 protein was 38/52(73.1%) in HCC tissues and 8/52(15.4%) in corresponding adjacent tissues, the difference was significant(P<0.01) and the expression of Gli2 protein was correlated with tumor differentiation, vascular invasion and lymph node metastasis(P<0.05).

Conclusion

The abnormal expression of Gli2 is closely related to tumorigenesis, invasion and metastasis of HCC, Gli2 may be an important biological marker of HCC and biological therapeutic target.

Key words: Hepatocellular carcinoma, Hedgehog signaling pathway, Gli2, Transcription factor

表1 Real time RT-PCR引物序列

目的基因	引物序列(5'-3')	产物长度（bp）
Gli2	上游序列TGGCCGCTTCAGATGACAGATGTTG	200
?	下游序列CGTTAGCCGAATGTCAGCCGTGAAG	?
18s rRNA	上游序列CCTGGATACCGCAGCTAGGA	112
?	下游序列GCGGCGCAATACGAATGCCCC	?

表1 Real time RT-PCR引物序列

目的基因	引物序列(5'-3')	产物长度（bp）
Gli2	上游序列TGGCCGCTTCAGATGACAGATGTTG	200
?	下游序列CGTTAGCCGAATGTCAGCCGTGAAG	?
18s rRNA	上游序列CCTGGATACCGCAGCTAGGA	112
?	下游序列GCGGCGCAATACGAATGCCCC	?

图1 Real time RT-PCR检测肝癌组织中Gli2 mRNA的相对表达水平

图2 Gli2蛋白的Western blot结果代表图

图3 Gli2蛋白在肝癌和癌旁组织中的表达（SP法，×400）

表2 Gli2蛋白表达与肝细胞癌临床病理特征之间的关系

临床病理特征		Gli2蛋白表达		χ ²值	P值
临床病理特征		阳性(n=38)	阴性(n=14)	χ ²值	P值
性别		?	?	0.044	0.834
?	男	26	10	?	?
?	女	12	4	?	?
年龄(岁)		?	?	0.061	0.805
?	≤60	23	9	?	?
?	>60	15	5	?	?
HBsAg		?	?	0.126	0.722
?	阳性	31	12	?	?
?	阴性	7	2	?	?
AFP(μg/L)		?	?	0.391	0.532
?	≤200	18	8	?	?
?	>200	20	6	?	?
肝硬化		?	?	0.316	0.574
?	Present	30	10	?	?
?	Absent	8	4	?	?
肿瘤大小(cm)		?	?	3.124	0.077
?	≤5	24	5	?	?
?	>5	14	9	?	?
TNM分期		?	?	0.931	0.335
?	I-II	22	6	?	?
?	Ⅲ-Ⅳ	16	8	?	?
分化程度		?	?	3.958	0.047^a
?	高	8	7	?	?
?	中、低	30	7	?	?
包膜		?	?	1.497	0.221
?	完整	12	7	?	?
?	不完整	26	7	?	?
血管侵犯		?	?	6.361	0.012 ^a
?	+	28	5	?	?
?	-	10	9	?	?
淋巴结转移		?	?	5.450	0.020^a
?	+	22	3	?	?
?	-	16	11	?	?

表2 Gli2蛋白表达与肝细胞癌临床病理特征之间的关系

临床病理特征		Gli2蛋白表达		χ ²值	P值
临床病理特征		阳性(n=38)	阴性(n=14)	χ ²值	P值
性别		?	?	0.044	0.834
?	男	26	10	?	?
?	女	12	4	?	?
年龄(岁)		?	?	0.061	0.805
?	≤60	23	9	?	?
?	>60	15	5	?	?
HBsAg		?	?	0.126	0.722
?	阳性	31	12	?	?
?	阴性	7	2	?	?
AFP(μg/L)		?	?	0.391	0.532
?	≤200	18	8	?	?
?	>200	20	6	?	?
肝硬化		?	?	0.316	0.574
?	Present	30	10	?	?
?	Absent	8	4	?	?
肿瘤大小(cm)		?	?	3.124	0.077
?	≤5	24	5	?	?
?	>5	14	9	?	?
TNM分期		?	?	0.931	0.335
?	I-II	22	6	?	?
?	Ⅲ-Ⅳ	16	8	?	?
分化程度		?	?	3.958	0.047^a
?	高	8	7	?	?
?	中、低	30	7	?	?
包膜		?	?	1.497	0.221
?	完整	12	7	?	?
?	不完整	26	7	?	?
血管侵犯		?	?	6.361	0.012 ^a
?	+	28	5	?	?
?	-	10	9	?	?
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?	+	22	3	?	?
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