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中华普通外科学文献(电子版)

中华普通外科学文献(电子版) ›› 2017, Vol. 11 ›› Issue (03) : 159 -163. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-0793.2017.03.004

所属专题： 文献；

论著

雷公藤内酯醇—聚乙烯亚胺—环糊精对乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/Taxol逆转作用的研究
王桂芬1, 李健林1, 王慧慧1, 朱益民2,†()   
  1. 1. 530000　南宁，广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科
    2. 314500　浙江省桐乡市第一人民医院外三科
  • 收稿日期:2016-11-11 出版日期:2017-06-01
  • 通信作者: 朱益民
  • 基金资助:
    浙江省级公益性技术应用研究计划项目(2014C33259); 自噬影响三阴性乳腺癌对多西他赛敏感性的研究项目(2015GXNSFAA39225)

Effects and mechanisms of triptolide-polyethylenimine-cyclodextrin reversing the multidrug resistance of MCF-7/Taxol in breast cancer

Guifen Wang1, Jianlin Li1, Huihui Wang1, Yimin Zhu2,†()   

  1. 1. Department of General Surgery, the First Teaching Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530000, China
    2. the Third Department of Surgery, Tongxiang First People’s Hospital, Tongxiang 314500, China
  • Received:2016-11-11 Published:2017-06-01
  • Corresponding author: Yimin Zhu
  • About author:
    Corresponding author: Zhu Yimin, Email:
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引用本文：

王桂芬, 李健林, 王慧慧, 朱益民. 雷公藤内酯醇—聚乙烯亚胺—环糊精对乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/Taxol逆转作用的研究[J/OL]. 中华普通外科学文献(电子版), 2017, 11(03): 159-163.

Guifen Wang, Jianlin Li, Huihui Wang, Yimin Zhu. Effects and mechanisms of triptolide-polyethylenimine-cyclodextrin reversing the multidrug resistance of MCF-7/Taxol in breast cancer[J/OL]. Chinese Archives of General Surgery(Electronic Edition), 2017, 11(03): 159-163.

目的

观察雷公藤内酯醇-聚乙烯亚胺-环糊精复合物（TP-PEI-CyD）对乳腺癌细胞MCF-7/Taxol耐药性的逆转作用并探讨其可能的作用机制。

方法

CCK-8法测紫杉醇和TP-PEI-CyD对MCF-7及MCF-7/Taxol的生长抑制率，计算出各自的IC50值、MCF-7/Taxol的耐药倍数以及TP-PEI-CyD对MCF-7/Taxol的低毒浓度;根据所得IC50值选择低毒浓度TP-PEI-CyD联合不同浓度的紫杉醇处理MCF-7/Taxol后，测得紫杉醇联合TP-PEI-CyD后的IC50，并计算逆转倍数；选择低毒浓度TP-PEI-CyD联合紫杉醇处理MCF-7/Taxol细胞后，应用流式细胞术测细胞凋亡情况；TP-PEI-CyD和紫杉醇单独或联合分别作用于MCF-7/Taxol，用RT-PCR检测耐药基因多药耐药相关蛋白（MRP）、肺耐药蛋白（LRP）以及谷胱甘肽转移酶（GST-π）的表达水平。

结果

TP-PEI-CyD对MCF-7/Taxol生长增殖有明显抑制作用，并提高MCF-7/Taxol对紫杉醇的敏感度，MCF-7/Taxol耐药性得到逆转（F=439.36，P<0.01）；紫杉醇联合TP-PEI-CyD的细胞凋亡率明显高于紫杉醇单独用药（F=17.91，P<0.05）。联合使用后MRP、LRP、GST-πmRNA表达水平降低（F=27.41、33.99、20.77，均P<0.01） 。

结论

TP-PEI-CyD对MCF-7/Taxol有增殖抑制和诱导凋亡作用，能有效逆转MCF-7/Taxo细胞的肿瘤耐药性,其机制可能与降低细胞耐药基因LRP、MRP以及GST-πmRNA表达水平相关。

关键词: 雷公藤属, 乳腺肿瘤, 多药耐药相关蛋白质类, 逆转, 紫杉醇
Objective

To investigate the reversal effect of triptolide-polyethylenimine-cyclodetrin (TP-PEI-CyD) on multidrug resistance in human breast cancer cells (MCF-7/Taxol) and its underlying mechanism.

Methods

The inhibitory effects of Taxol and TP-PEI-CyD on growth of MCF-7 cells and MCF-7/Taxol cells were examined by CCK-8 assay and their IC50 values and the resistance index (RI) of MCF-7/Taxol cells and the low-toxic concentration of TP-PEI-CyD inhibiting the growth of MCF-7/Taxol cells were calculated. Based on the IC50 results, MCF-7/Taxol cells were treated with a selected low-toxic concentration of TP-PEI-CyD combined with different concentrations of Taxol and detected by CCK-8 assay, and then the IC50 and reverse times were calculated. MCF-7/Taxol cells were treated with a selected low-toxic concentration of TP-PEI-CyD and Taxol combined, and then the influence on doxorubicin-induced apoptosis, and the expressions of the mRNA of multidrug resistance protein (MRP), lung resistance protein (LRP) and glutathione S-transferase-π (GST-π) were detected by flow cytometry and RT-PCR, respectively.

Results

TP-PEI-CyD in combination with Taxol significantly inhibited cell proliferation (F=439.36, P<0.01) and induced apoptosis with an increase in MCF-7/Taxol cells when compared to TP-PEI-CyD or Taxol used alone (F=17.91, P<0.05). MCF-7/Taxol cells received TP-PEI-CyD in combination with Taxol treatmental also had a lower expression level of MRP、LRP and GST-π mRNA (F=27.41, 33.99, 20.77, all P<0.01).

Conclusion

TP-PEI-CyD can suppress the proliferation, induce apoptosis of MCF-7/Taxol, and reverse MDR in MCF-7/Taxol cells, its mechanism might be related to reduce the mRNA expression of MRP, LRP and GST-π.

Key words: Tripterygium, Breast neoplasms, Multidrug resistance-associated proteins, Reverse, Taxol
表1 目的基因引物序列
基因 引物序列
LRP 上游：5’-GAGGAGCAGTTCACAGTGTTG-3’
下游：5’- CGATGGTGATGACGTCTGTGA-3’;
MRP 上游：5’- GCCGATGGCTCCGACC-3’
下游：5’- AAAACAAGGCACCCACACGA-3’
GST-π 上游：5’-CAGGAGGGCTCACTCAAAGC-3’
下游：5’- CAGGTGACGCAGGATGGTAT-3’
β-actin 上游：5’-AGCGGGAAATCGTGCGTG-3’
下游：5’-CAGGGTACATGGTGGTGCC-3’
表2 紫杉醇和TP-PEI-CyD对MCF-7、MCF-7/Taxol的增殖抑制作用( n = 3，μg/ml，±s)
药物 MCF-7 MCF-7/Taxol 耐药倍数 F值
紫杉醇 0.23±0.02 6.19±0.17* 26.91 3575.45
TP-PEI-CyD 7.41±0.89 3.39±0.38 53.99
表3 TP-PEI-CyD对耐药株MCF-7/Taxol的逆转效果(±s)
组别 IC50 逆转倍数 F值 P值
MCF-7/Taxol+紫杉醇 6.19±0.17 ——
MCF-7/Taxol+紫杉醇+0.5 μg/ml TP-PEI-CyD 4.43±0.30* 1.39 77.93 0.001
MCF-7/Taxol+紫杉醇+1.5 μg/ml TP-PEI-CyD 3.28±0.16* 1.89 439.36 0.000
图1 各组药物作用于MCF-7/Taxol细胞的凋亡率　1为紫杉醇组，2为紫杉醇+0.5 μg/ml TP-PEI-CyD组，3为紫杉醇+1.5 μg/ml TP-PEI-CyD组；*P<0.05，#P<0.01
图2 三种耐药基因的表达量与紫杉醇组比，*P<0.01；与TP-PEI-CyD组比，#P<0.01
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