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中华普通外科学文献(电子版)

中华普通外科学文献(电子版) ›› 2018, Vol. 12 ›› Issue (02) : 90 -95. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-0793.2018.02.005

所属专题： 文献；

论著

人胃癌原位移植转移动物模型的构建
赵广银1, 苏乔1,†(), 李雯雯1, 李武国1   
  1. 1. 510080　广州，中山大学附属第一医院动物实验中心
  • 收稿日期:2017-10-07 出版日期:2018-04-01
  • 通信作者: 苏乔
  • 基金资助:
    广东省科技计划项目(2014A030304016)

Establishment of an orthotopic transplantation tumor model of human gastric cancer complicated by metastasis

Guangyin Zhao1, Qiao Su1,†(), Wenwen Li1, Wuguo Li1   

  1. 1. Animal Laboratory Center, the First AffiliatedHospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, China
  • Received:2017-10-07 Published:2018-04-01
  • Corresponding author: Qiao Su
  • About author:
    Corresponding author: Su Qiao, Email:
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引用本文：

赵广银, 苏乔, 李雯雯, 李武国. 人胃癌原位移植转移动物模型的构建[J]. 中华普通外科学文献(电子版), 2018, 12(02): 90-95.

Guangyin Zhao, Qiao Su, Wenwen Li, Wuguo Li. Establishment of an orthotopic transplantation tumor model of human gastric cancer complicated by metastasis[J]. Chinese Archives of General Surgery(Electronic Edition), 2018, 12(02): 90-95.

目的

构建人胃癌原位移植转移动物模型，并利用活体成像系统对肿瘤转移进行可视化的实时监测评价。

方法

构建带有绿色荧光蛋白序列和萤火虫荧光素酶序列的慢病毒重组表达质粒；慢病毒包装感染人BGC-823胃癌细胞株，筛选得到BGC-823-eGFP-luc2稳转株；细胞接种高度免疫缺陷小鼠腋下，建立人胃癌皮下种植动物模型，继而建立人胃癌肿瘤皮下传代动物模型；将皮下传代模型肿瘤组织原位移植高度免疫缺陷小鼠胃部，构建人胃癌原位移植转移动物模型；利用活体成像系统对以上模型进行监测评价。

结果

获得稳定表达绿色荧光蛋白和萤火虫荧光素酶的BGC-823-eGFP-luc2细胞株；成功构建皮下种植和传代动物模型；成功构建人胃癌原位移植转移动物模型。

结论

慢病毒感染方法适用于人胃癌BGC-823-eGFP- luc2稳转株的建立；利用BGC-823-eGFP-luc2细胞株可以快速构建人胃癌皮下种植动物模型和原位移植转移动物模型，利用活体成像系统可以直观、非侵入的有效监测胃癌远端转移灶的发生、发展情况。

关键词: 胃肿瘤, 动物模型, 原位移植, 活体成像系统
Objective

To establish animal models of orthotopic transplantation of human gastric carcinoma and provide the visible research method to monitor tumor micrometastases with in-vivo imaging system.

Methods

The lentiviral expression vectors carrying luc2, eGFP and puromycin genes was constructed. BGC-823 -eGFP-luc2 stable strain was screened after BGC-823 cell line was infected by the lentivirus. Then animal models with subcutanious implatation and orthotopic transplantation were established.

Results

BGC-823-eGFP-luc2 cell stably expressing green fluorescent protein and firefly luciferase was obtained. The animal models of subcutaneous implantation and orthotopic transplantation were successfully established.

Conclusions

The method of lentiviral infection is suitable for the establishment of human gastric cancer BGC-823-eGFP-luc2 cell strain, which can be used to establish human gastric cancer subcutaneously and orthotopic transplantation models complicated by metastasis rapidly. The in vivo imaging system can be used to monitor the occurrence and development of distal metastasis of gastric cancer.

Key words: Stomach neoplasms, Animal models, Orthotopic transplantation, In-vivo imaging system
图1 CD513B-1-luc2重组表达质粒的构建　A为Trans 2K Plus Ⅱ DNA marker标准条带；B为pGL4.20质粒luc2基因PCR扩增产物；C为CD513-B质粒与luc2扩增产物酶切鉴定；D为重组质粒与pGL4 20载体luc2片段BLAST比对结果
图2 应用于活体成像的BGC-823-eGFP-luc2细胞系构建及流式分选　A为293T细胞慢病毒感染48 h荧光表达情况（×40）；B为BGC-823细胞慢病毒感染48 h荧光表达情况（×40）；C为流式分选BGC-823-eGFP-luc2双标细胞比例
图3 梯度稀释法检测BGC-823-eGFP-luc2细胞荧光素酶活性
图4 活体成像系统监测人胃癌皮下种植和皮下传代模型体内生物发光情况　A为荧光素酶在人胃癌皮下种植动物模型中表达监测（n=3）；B为荧光素酶在人胃癌皮下种植传代动物模型中表达监测（n=3）
图5 活体成像系统监测人胃癌原位移植转移模型体内原发灶和转移灶生物发光情况　A为人胃癌原位移植转移模型体内原发灶和转移灶生物发光监测（n=8）；B为基于整体生物发光强度绘制模型肿瘤生长曲线
图6 人胃癌原位移植转移模型胃体、肝脏、肺脏解剖及病理切片分析（HE染色　×40、×200） A为各模型鼠胃体、肝脏、肺脏整体解剖情况（红色箭头所指处为肝脏明显肿瘤结节）；B为胃部肿瘤原发灶病理切片结果；C为肝脏肿瘤转移灶病理切片结果；D为肺脏肿瘤转移灶病理切片结果
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