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中华普通外科学文献(电子版)

中华普通外科学文献(电子版) ›› 2024, Vol. 18 ›› Issue (06) : 430 -436. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-0793.2024.06.006

论著

LINC00520 通过miR-519b-3p/HIF1A 轴促进胃癌的侵袭转移
安杰1, 牛云峰1, 刘伟2,†()   
  1. 1.050082 石家庄，解放军联勤保障部队第九八〇医院病理科
    2.050082 石家庄，解放军联勤保障部队第九八〇医院普外一科
  • 收稿日期:2024-06-04 出版日期:2024-12-01
  • 通信作者: 刘伟
  • 基金资助:
    河北省卫生健康委医学科学研究课题计划项目（20220247）

LINC00520 promoting the invasion and metastasis of gastric cancer through miR-519b-3p/HIF1A axis

Jie An1, Yunfeng Niu1, Wei Liu2,†()   

  1. 1.Department of Pathology
    2.Department of General Surgery， the 980th Hospital of Joint Logistics Support Force of PLA， Shijiazhuang 050082， China
  • Received:2024-06-04 Published:2024-12-01
  • Corresponding author: Wei Liu
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引用本文：

安杰, 牛云峰, 刘伟. LINC00520 通过miR-519b-3p/HIF1A 轴促进胃癌的侵袭转移[J]. 中华普通外科学文献(电子版), 2024, 18(06): 430-436.

Jie An, Yunfeng Niu, Wei Liu. LINC00520 promoting the invasion and metastasis of gastric cancer through miR-519b-3p/HIF1A axis[J]. Chinese Archives of General Surgery(Electronic Edition), 2024, 18(06): 430-436.

目的

探讨LINC00520 在胃癌中的功能和分子机制，揭示其在胃癌发展中潜在作用。

方法

筛选GEO 数据库中胃癌样本，寻找与胃癌恶性进展相关的差异表达基因。qPCR 检测LINC00520 在胃癌中的表达水平，细胞功能实验探索LINC00520 对胃癌进展的潜在影响。生物信息学分析LINC00520 与miR-519b-3p 和HIF1A 之间的关联，并利用双荧光素酶报告基因和RNA 免疫沉淀实验验证它们之间的结合活性。

结果

胃癌中LINC00520 表达显著上调（P＜0.01），LINC00520过表达促进胃癌细胞的恶性进展（均P＜0.01）。LINC00520 通过竞争性靶向miR-519b-3p，上调HIF1A 表达（均P＜0.01）。

结论

LINC00520 在胃癌中高表达，通过靶向miR-519b-3p/HIF1A轴发挥着关键调节作用，为胃癌诊断和治疗提供新的靶点。

关键词: LINC00520, 胃肿瘤, RNA, 长链非编码, miR-519b-3p, HIF1A, ceRNA

Objective

To investigate the function and molecular mechanism of LINC00520 in gastric cancer and to reveal the potential role of LINC00520 in gastric cancer development.

Methods

GEO database were screened for differentially expressed genes associated with malignant progression of gastric cancer. qPCR was performed to detect the expression of LINC00520 in gastric cancer， and cellular function experiments were performed to explore the potential effects of LINC00520. The association between LINC00520 and miR-519b-3p and HIF1A was detected by bioinformatics analysis， and their binding activities were verified by using dual luciferase reporter gene and RNA immunoprecipitation assays.

Results

In gastric cancer， the expression of LINC00520 was significantly increased （P＜0.01）， and LINC00520 promoted the malignant progression of gastric cancer cells （P＜0.01）. By bioinformatics， dual luciferase reporter gene and RNA immunoprecipitation assays， it was found that LINC00520 upregulated HIF1A expression by competitively targeting miR-519b-3p （P＜0.01）.

Conclusion

High expression of LINC00520 in gastric cancer plays a critical role by targeting the miR-519b-3p/HIF1A axis， which provides new targets for the diagnosis and treatment of gastric cancer.

Key words: LINC00520, Stomach neoplasms, RNA， long noncoding, miR-519b-3p, HIF1A；ceRNA
表1 qPCR 引物序列及反应条件
基因 引物序列 退火温度（℃） 产物大小（bp）
LINC00520 F：5'-GCAGTTGAGCTTCTTGTGCC-3' 60 250
R：5'-GTGGTCAGAGGTGGCCATAC-3'
HIF1A F：5'-GCCCTAACGTGTTATCTGTCG-3' 58 248
R：5'-CTTTTGCTCCATTCCATTCTG-3'
GAPDH F：5'-AGGTGAAGGTCGGAGTCAACG-3' 58 102
R：5'-AGGGGTCATTGATGGCAACA-3'
表2 LINC00520 敲低位点及序列
位点 正义链序列 反义链序列
372 GAATAGTAGTAGTTAACAA TTGTTAACTACTACTATTC
542 GGATGCAGAAGTACTCATA TATGAGTACTTCTGCATCC
708 GGACTGCAATTCACAAGAA TTCTTGTGAATTGCAGTCC
1344 GATTCTACAGCTCAGCAAA TTTGCTGAGCTGTAGAATC
图1 LINC00520 在胃癌中高表达 A 为GEO 数据库预测胃癌中差异表达基因；B 为GEPIA 数据库显示LINC00520在胃癌组织中高表达；C 为qPCR 检测LINC00520 在67对胃癌标本和正常样本中的表达情况；D 为LINC00520在不同亚组的相对表达；E 为qPCR 检测LINC00520 在不同胃癌细胞系的表达；**P＜0.01
表3 LINC00520、miR-519b-3p 和HIF1A 在胃癌中的相对表达量（）
项目 n LINC00520 miR-519b-3p HIF1A
表达量 t值 P值 表达量 t值 P值 表达量 t值 P值
年龄（岁） -0.008 0.996 0.610 0.545 -0.463 0.644
≤60 24 2.263±1.287 0.631±0.376 2.162±1.338
＞60 43 2.265±1.443 0.583±0.266 2.313±1.241
性别 0.600 0.551 -0.897 0.372 0.830 0.409
男 47 2.331±1.530 0.578±0.299 2.343±1.275
女 20 2.109±0.953 0.652±0.329 2.061±1.264
淋巴结转移 -2.719 0.008 4.725 ＜0.001 -4.080 ＜0.001
无 21 1.617±0.826 0.829±0.275 1.417±0.888
有 46 2.560±1.484 0.496±0.264 2.643±1.236
组织分化程度 -0.017 0.986 -0.715 0.481 0.204 0.839
中、高 38 2.262±1.395 0.577±0.273 2.286±1.151
低 29 2.268±1.383 0.631±0.351 2.222±1.428
TNM分期 -0.330 0.743 0.792 0.427 -1.401 0.166
Ⅰ+Ⅱ 18 2.172±1.115 0.650±0.251 1.903±1.327
Ⅲ+Ⅳ 49 2.298±1.474 0.582±0.327 2.389±1.235
图2 LINC00520 促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭 A为qPCR 检测转染sh-LINC00520 胃癌细胞中LINC00520表达；B 为MTS 检测转染sh-LINC00520 胃癌细胞的增殖能力；C 为克隆形成实验检测sh-LINC00520 转染胃癌细胞的克隆数量；D、E 为Transwell 实验验证转染sh-LINC00520 胃癌细胞的迁移和侵袭能力；**P＜0.01
图3 LINC00520 在胃癌中作用于miR-519b-3p A、B 为LINC00520 在MGC823 和SGC7901 细胞核和细胞质的相对含量；C 为生物信息学分析miR-519b-3p 与LINC00520 的结合位点；D 为qPCR 检测miR-519b-3p在胃癌中表达情况；E 为不同亚组中miR-519b-3p 相对表达；F 为qPCR 分析LINC00520 和miR-519b-3p 相关性；G 为RIP 实验显示miR-519b-3p 对LINC00520 富集程度；H 为双荧光素酶报告实验验证LINC00520 和miR-519b-3p 之间结合活性；**P＜0.01
图4 miR-519b-3p 对胃癌细胞生物学行为的影响 A为miR-519b-3p mimics 或 inhibitor 转染后，qPCR 检测转染效率；B、C 为MTS 和克隆形成实验显示miR-519b-3p 对增殖能力的影响；D 为Transwell 迁移实验显示miR-519b-3p 对迁移能力的影响；E 为Transwell 侵袭实验显示miR-519b-3p 对侵袭能力的影响；**P＜0.01
图5 HIF1A 作为miR-519b-3p 靶基因，受LINC00520调控 A 为生物信息学方法预测miR-519b-3p 在HIF1A 3′UTR 上的结合位点和相应的突变体序列；B 为qPCR 检测胃癌组织中HIF1A 表达；C 为HIF1A 在不同亚组表达；D 为HIF1A 在胃癌和正常组织中免疫组化染色（SP×200）；E 为胃癌中miR-519b-3p 和HIF1A 相关性；F 为胃癌样本中LINC00520 和HIF1A 相关性；G 为荧光素酶报告实验显示miR-519b-3p 和HIF1A 结合活性；**P＜0.01
图6 LINC00520 和miR-519b-3p 共同调节HIF1A 表达和胃癌进展 A 为qPCR 测定转染LINC00520 和miR-519b-3p 对HIF1A mRNA 影响；B 为Western blotting 测定转染LINC00520 和miR-519b-3p 对HIF1A 蛋白影响；C 为MTS 检测显示共转染对胃癌细胞增殖的影响；D 为克隆形成实验显示共转染对胃癌细胞增殖的影响；E 为Transwell 迁移实验显示共转染对胃癌细胞迁移能力的影响；F 为Transwell 侵袭实验显示共转染对胃癌细胞侵袭能力的影响；**P＜0.01
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