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中华普通外科学文献(电子版)

中华普通外科学文献(电子版) ›› 2010, Vol. 04 ›› Issue (05) : 415 -419. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-0793.2010.05.004

所属专题： 文献；

论著

CytoMPS原位疫苗治疗肝癌的抗瘤作用及其免疫效应
匡铭1, 刁竞芳2, 彭宝岗1,†(), 沈顺利1, 王晔1, 吴浩3, 陈斌1   
  1. 1. 510080　广州，中山大学附属第一医院肝胆外科
    2. 广东省中医院肝胆胰外科
    3. 广州市第十二人民医院普外科
  • 收稿日期:2010-04-30 出版日期:2010-10-01
  • 通信作者: 彭宝岗
  • 基金资助:
    国家自然基金资助项目(30672052, 30872486); 广东省自然基金资助项目(8151008901000211)

Cytokines microparticles (CytoMPS)-in situ vaccination for hepatocellular carcinoma: in vivo and in vitro responses

Ming KUANG1, Jing-fang DIAO2, Bao-gang PENG1,†(), Shun-li SHEN1, Ye WANG1, Hao WU3, Bin CHEN1   

  1. 1. Department of Hepatobiliary Surgery, the First Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, China
  • Received:2010-04-30 Published:2010-10-01
  • Corresponding author: Bao-gang PENG
  • About author:
    Corresponding Author: PENG Bao-gang, Email:
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引用本文：

匡铭, 刁竞芳, 彭宝岗, 沈顺利, 王晔, 吴浩, 陈斌. CytoMPS原位疫苗治疗肝癌的抗瘤作用及其免疫效应[J]. 中华普通外科学文献(电子版), 2010, 04(05): 415-419.

Ming KUANG, Jing-fang DIAO, Bao-gang PENG, Shun-li SHEN, Ye WANG, Hao WU, Bin CHEN. Cytokines microparticles (CytoMPS)-in situ vaccination for hepatocellular carcinoma: in vivo and in vitro responses[J]. Chinese Archives of General Surgery(Electronic Edition), 2010, 04(05): 415-419.

目的

制作成细胞因子缓释微粒原位瘤苗（CytoMPS-ISV），观测CytoMPS-ISV抗瘤作用及其免疫效应。

方法

C57BL/6J小鼠皮下移植性肝癌模型瘤内注射CytoMPS 3次制作CytoMPS-ISV，观察其抗肿瘤作用及小鼠生存率；流式细胞仪检测小鼠外周血淋巴细胞变化，免疫组化法检测肿瘤组织的CD4+、CD8+和NK1.1+细胞浸润情况，体外检测小鼠脾CTL和NK细胞的杀瘤活性，检测疫苗诱导脾CTL的抗体阻断作用。

结果

与PBS注射组和对照组相比，瘤内注射CytoMPS后肿瘤生长受到显著抑制（P<0.01）。瘤内注射CytoMPS组血液中及局部浸润的CD4+、CD8+和NK细胞明显高于PBS组和对照组（P<0.05）；淋巴细胞杀伤试验结果显示瘤内注射CytoMPS组小鼠的脾CTL对靶细胞的杀伤率明显高于PBS组（P<0.01）和对照组（P<0.05）；抗体阻断作用试验显示接种疫苗的小鼠脾CTL的杀瘤活性可被抗CD8+、抗MHC-I单克隆抗体所阻断，但不被抗CD4+、抗MHC-II单克隆抗体所阻断。

结论

CytoMPS-ISV可以显著抑制肿瘤生长，能明显增强机体的抗肿瘤免疫作用，其诱导的CTL杀瘤特性是由MHC-I限制的CD8+ T细胞所介导。

关键词: 细胞因子缓释微粒, 肝细胞癌, 疫苗, 免疫治疗
Objective

To prepare the CytoMPS-related in situ vaccine (CytoMPS-ISV) and observe its protective and therapeutic antitumor effects in treatment of mice hepatoma.

Methods

Three times of intratumoral injection of CytoMPS in C57BL/6J mice subcutaneous hepatoma were performed, and the tumor growth and mice survival rates were observed. The proportions of peripheral blood lymphocytes were detected by FACS. The killing efficacy of cytotoxic T lymphocytes(CTLs) derived from spleens of CytoMPS-ISV vaccinated mice was evaluated with and without antibody-blocking preparation. Extent of tumor-infiltrating CD4+、CD8+ and NK1.1+ cells were also detected with immunohistochemical stain(IHC).

Results

Compared with the control group, the tumor growth in CytoMPS-ISV group was significantly inhibited(P<0.01). Moreover, the proportions of CD4+, CD8+ T cell and natural killer cell (NK) in peripheral blood in CytoMPS-ISV group were significantly higher, so were those of tumor-infiltrating lymphocytes in CytoMPS group. Compared with those in the control groups, the cytotoxicities of splenic CTL in CytoMPS-ISV group were significantly enhanced, which could be blocked by anti-mouse MHC Class I and anti-mouse CD8 antibody, but not by anti-mouse MHC Class II and anti-mouse CD4 antibody.

Conclusion

CytoMPS-ISV can significantly inhibit tumor growth and induce anti-tumor immunity. The killing efficacy of CytoMPS-ISV-induced CTLs is related to CD8+ T cells restricted by MHC-I.

Key words: CytoMPS, Hepatocellular carcinoma, Vaccine, Immunotherapy
图1 瘤内注射CytoMPS后肿瘤生长受到显著抑制。A组，瘤内注射CytoMPS组；B组，瘤内注射PBS组；C组，对照组。
图2 瘤内注射CytoMPS后，3组小鼠生存率无显著差异。A组，瘤内注射CytoMPS组；B组，瘤内注射PBS组；C组，对照组。
表1 3组小鼠外周血淋巴细胞组成的比较（%，±s）
组别 n CD4+ CD8+ NK1.1+
A 3 41.00±1.32* 34.59±1.71* 13.08±1.59*
B 3 23.41±2.74 20.73±1.36 7.62 ±1.06
C 3 24.82±2.22 20.26±0.39 7.39±0.60
图3 肿瘤组织免疫组化检测CD4+ T细胞3a)瘤内注射CytoMPS组肝癌组织可见中等量CD4 + T细胞浸润（IHC, ×200)；3b PBS对照组肝癌组织未见CD4+ T细胞浸润（IHC, 200×)
图4 肿瘤组织免疫组化检测CD8+ T细胞。4a)瘤内注射CytoMPS组组肝癌组织可见较多CD8+ T细胞浸润(IHC, 200×)。4b）PBS对照组肝癌组织未见CD8+ T细胞浸润(IHC,×200)
图5 肿瘤组织免疫组化检测NK1.1+细胞5a）瘤内注射CytoMPS组肝癌组织可见中等量NK1.1+细胞浸润(IHC,×200)。5b）PBS对照组肝癌组织未见NK1.1+细胞浸润(IHC, ×200)
表2 肝癌组织中浸润的淋巴细胞
组别 切片数量 CD4+, CD8+, NK1.1 +细胞浸润程度
A 9 + + +*
B 9 +
C 9 +
图6 抗体阻断试验：分别用抗- CD8+、抗-MHC-Ⅰ、抗- CD4+、抗-MHC-Ⅱ单克隆抗体封闭后进行LDH释放法检测脾CTLs的杀伤活性。
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